Метод
Коха. Исходный материал (дрожжевой осадок,
вино, бродящий сок, взвесь почвы и т. д.) разбавляют в зависимости от
количества клеток в соотношении 1:100 или 1:1000 стерильной водой
или стерильным виноградным суслом. При помощи стерильных микропипеток
на 0,1 мл вносят в стерильные чашки Петри соответственно 1 каплю (0,05
мл) взвеси, две и три. Во все чашки вливают из пробирок по 10 мл
агаризованного виноградного сусла, расплавленного и охлажденного до
40-45°С. Распределяют содержимое чашки равномерно по всей ее
поверхности и оставляют застыть на горизонтальной плоскости. Через
несколько дней на поверхности агара появляются колонии дрожжей,
достаточно удаленные друг от друга, чтобы можно было их пересеять, не
затронув соседние. Если же колонии расположены густо, необходимо
повторить опыт, увеличив разбавление исходного материала.
Метод Коха не дает гарантии, что колония происходит из одной клетки.
Для строгих научных исследований этот способ непригоден. Он практичен
для разделения отдельных родов и видов дрожжей.
Метод Линднера.
Исходный материал разбавляют стерильным виноградным
соком из такого расчета, чтобы в одной капле содержалась одна дрожжевая
клетка. На стерильное покровное стекло наносят 10 капелек взвеси при
помощи стерильного чертежного пера. Покровное стекло осторожно
переворачивают над стерильным предметным стеклом с углублением, на дне
которого находится стерильная вода. Края покровного стекла смазывают
парафином и препарат микроскопируют. Капли, содержащие по одной
дрожжевой клетке, обводят чернилами. После 2-3-дневного размножения
отмеченные капли переносят в стерильную питательную среду для
дальнейшего размножения.
Метод Линднера имеет 2 модификации (разновидности). По первой
модификации каплю, в которой находятся 2, 3 или 4 клетки, с помощью
платиновой петли, заполненной виноградным соком, переносят на
затвердевшую питательную среду в пробирке, проводя петлей черту. Из
каждой клетки вырастут колонии, которые будут достаточно отдалены друг
от друга, чтобы можно было их пересеять.
По другой модификации клетки для выведения чистой культуры берут из
молодой суточной культуры. Взвесь готовят в стерильной воде, к которой
добавлен раствор метиленовой сини в разбавлении 1:10000. Разбавляют
до тех пор, пока в одной капле не будет 0-2 клетки дрожжей.
На стерильное предметное стекло наносят кашли взвеси, которые должны
быть не больше поля зрения при увеличении в 150 раз, и микроскопируют.
Если содержание дрожжей в капле не превышает двух, приступают к опыту:
на осколки покровного стекла, диаметр которых меньше диаметра пробирки,
наносят по одной капле взвеси и помещают на стерильное предметное
стекло. Если капля содержит одну клетку, осколок стерильным пинцетом
переносят в пробирку со стерильной питательной средой для размножения.
Надежность опыта повышается, если взвесь делать в 0,01 % -ном растворе
сорбита.
Метод
Клинкгаммера. Суспензию дрожжей разбавляют и наносят на
стерильное предметное стекло так, чтобы в поле зрения микроскопа при
увеличении в 450 раз было видно лишь несколько клеток. Среди этих
клеток выбирают одну, которую всасывают капилляром и переносят в
стерильную питательную среду.
Выделение
клеток дрожжей при помощи отделителя Годюруа. Этот метод
основан на тонком распылении микросуспензии в виде аэрозоли при помощи
прибора, сконструированного Годюруа. При этом образуются настолько
мелкие капельки, что они не могут содержать более одной клетки. Это
было доказано экспериментально.
Выделенную любым способом чистую культуру хранят при температуре
+5°С.
Пересевы делают через 6 мес на виноградное сусло или 10%-ный раствор
сахарозы.
